BalanCD HEK293 Viral Feed

將HEK293細胞中的病毒載體產量提高10倍

◆收益良多

BalanCD HEK293 Viral Feed可通過提高病毒載體的產量，開發改變生命的療法和疫苗。

高性能：血清型 AAV2、AAV5 和AAV9 的病毒基因組 (VG) 滴度增加了3至10 倍

靈活：可兼容一系列不可知的基礎生長培養基和轉染方法

高效：與不含補料的基礎培養基對照組相比，病毒包裝效率提高了67%

◆HEK293 細胞系的不間斷補料供應

專為HEK293細胞設計的病毒補料

AAV流程：從生產到治療性蛋白的表達

病毒滴度成倍增加

BalanCD HEK293 Viral Feed 可提高 VG/capsid產量，并使滴度成倍增加，從而幫助生產商為其應用獲得更多產出。

細胞生長：活細胞密度 (VCD) 和活率保持一致

圖1. 將HEK293懸浮細胞（細胞系1）接種在 BalanCD HEK293 培養基（30 mL）中，24 h后使用PEIpro方法，以 1.8-1.9 X10⁶的細胞密度轉染1.5 μg DNA/mL（DNA 與PEI 的比率為1 : 2).轉染后的24 h， 以12% v/v的濃度添加BalanCD HEK293 Viral Feed。 收獲時繪制活細胞密度（A）和活力（B）。 數據顯示補料培養基對細胞生長和活性沒有不利影響。

添加補料后 AAV2 滴度提高

圖2. 使用經過三次循環凍融的細胞提取物檢測AAV2病毒基因組滴度和衣殼滴度，再通過離心澄清，并用DNAse I和裂解緩沖液處理，然后進行qPCR（使用 AAVpro 滴定試劑盒，Takara Bio）和ELISA（AAV2 滴定 ELISA，Progen）。數據表明，添加補料培養基使AAV2 產量在VG方面提高了約10倍，在衣殼滴度方面提高了6倍。 整體結果顯示，病毒包裝率提高了約 67%，從基礎的 13% 提高到基礎+補料的 21.81%（數據未顯示）。

多種 AAV 血清型的病毒滴度  

圖3. AAV2、AAV5 和 AAV9 在 HEK293 懸浮細胞系 2 中產生。將細胞接種在 BalanCD HEK293 培養基（30 mL）中，24 h后，當細胞密度為2.8 X 10 ⁶ cells/mL 時，使用 1 μg DNA/mL 的 PEIpro 方法進行轉染（DNA 與 PEI 的比例為 1:2）。轉染后 24 h，加入濃度為 12% v/v 的 BalanCD HEK293 Viral Feed。通過微滴式數字PCR（ddPCR）檢測VG 滴度數據。與對照（僅有基礎培養基）相比，血清型AAV2、AAV5 和 AAV9 的病毒基因組 (VG) 滴度增加了 3 倍以上。（按上圖所示）

BalanCD HEK293 Viral Feed 在 10 L放大反應中提高了 AAV 滴度

圖 4. 驗證 BalanCD HEK293 Viral Feed在 10 L 生物反應器規模中提高 AAV5 產量的性能。將HEK293 懸浮細胞（細胞系 2）以 0.8X106 cells/mL 的密度接種在 8.3 L 培養體積 的10 L 生物反應器（XDR10 生物反應器）中。轉染 24 h后， 以 12% v/v 的濃度添加BalanCD HEK293 Viral Feed。 使用 ddPCR 檢測滴度。

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